一、小鼠单克隆抗体

小鼠单克隆抗体是由激活的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞产生的，既能分泌抗体又能无限增殖的鼠源单克隆抗体。

图1：单克隆抗体制备

二、小鼠单克隆抗体制备方法

w66最给力的老牌生物能够为客户提供两种方式的小鼠单克隆抗体制备服务，一种是利用噬菌体抗体展示技术制备重组单克隆抗体；另一种是利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞系。

传统单克隆抗体技术是指由骨髓瘤细胞和分泌抗体的B淋巴细胞融合（全人源单克隆抗体制备技术除外）后形成杂交瘤细胞并分泌单克隆抗体，由于其只作用于抗原复合分子上某一抗原决定簇，因此具有专一性强、效价高等特点。

三、小鼠单克隆抗体制备优点

小鼠是生物学和医学领域中常见的模式动物之一，鼠单抗也是常用的单克隆抗体，具有特异性强，可快速、大量、连续生产等优势。 

四、w66最给力的老牌生物多种鼠单抗优势产品

基于成熟的抗体平台体系建设，w66最给力的老牌生物目前生产有多种类型的鼠单抗产品。其中标签抗体如HRP标记小鼠抗人IgG(FC)（Cat：SA2265），动物疫病抗体如小鼠抗猪伪狂犬单克隆抗体（Cat：ANAB1024），小分子抗体如青霉素小鼠单抗（Cat：PA042），用于WB、Elisa检测等多种项目。

五、w66最给力的老牌生物可以提供高质量的小鼠单克隆抗体制备服务

w66最给力的老牌生物提供的小鼠单克隆抗体制备服务，流程主要包括：抗原制备-小鼠免疫-细胞融合-细胞筛选-细胞亚克隆-腹水生产-腹水纯化。

图2：小鼠单克隆抗体制备流程

1、抗原准备

客户提供抗原，可接受蛋白，多肽以及各种小分子抗原，和弗氏佐剂一起混合进行免疫。

表1：小鼠单克隆抗体制备规划时间进程表 

2、小鼠免疫

准备5只Balb/c小鼠，间隔14天进行免疫源注射，采血进行效价检测。

3、细胞融合、筛选和亚克隆

选取血清效价满足要求（蛋白/病毒>105；多肽/小分子>104）的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，有限稀释融合细胞，96孔板克隆化， HAT筛选杂交瘤细胞，经免疫原检测，挑选1-10个阳性克隆，进行亚克隆扩大培养到96孔板， ELISA筛选阳性亚克隆，并进行扩大培养，小鼠经过融合、有限稀释法的一次克隆及上清检测，得到多株符合项目要求的细胞株，选择4个细胞株进行后续腹水制备。

4、腹水抗体纯化

 客户选取的杂交瘤细胞制备腹水，Protein A/G法进行腹水纯化。

4.1、蛋白A/G-Sepharose柱的处理

1) 选择合适的层析柱，清洗干净，并垂直固定在铁架台上。

2) 取适量的蛋白G-Sepharose的乙醇悬浮液，静置等胶沉淀后吸去上层乙醇，再用结合缓冲液多次悬浮彻底洗去乙醇。

3) 将结合缓冲液与蛋白A/G混合成50-70%的浆状物，把浆状物倒入柱内。

4) 连接蠕动泵，以50cm/h（对于直径1cm的柱相当于0.7ml/min）的速率装柱，待柱体完全沉降后，继续用5～10倍体积的结合缓冲液清洗柱体。

4.2、样品处理与上样

1) 腹水样品 12,000×g，离心10min后，取上清进行0.45μm孔径过滤。

2) 上样:将过滤好的样品液以0.4ml/min流速加入亲和柱内。

3) 样品进入介质后，将流速调低至0.7ml/min，继续用10倍体积结合缓冲液清洗，直到A280值恢复到本底水平（＜0.02）。

4.3、样品洗脱

1) 保持速率不变，换洗脱缓冲液洗脱结合在柱中的抗体，洗脱液以2ml为洗脱组分分部收集（2ml/管）。收集试管中要加入0.1ml中和缓冲液，以便及时中和洗脱所得抗体液的PH值。

2) 检测每管的A280，当A280<0.05时停止洗脱，汇集a280大于等于0.2的峰组分。<>

3) 若需要除去盐分或改变缓冲液，可以在磷酸盐缓冲液（PBS）中透析，或在其它特定的溶液中透析。

4.4、纯度鉴定

电泳：取纯化好的蛋白按照4:1比例加入5Xloading buffer后100℃煮样10min，取10ul上样进行SDS-PAGE电泳：120v，90分钟后，考马斯亮蓝染色30min后进行脱色。

5、交付

w66最给力的老牌生物交付3-5株阳性克隆株，高特异性与高亲和性的小鼠单克隆纯化抗体，实验报告和鉴定报告：包括SDS-PAGE、ELISA检测等结果，并根据客户需求，提供抗体验证结果，如Western Blot、IHC、IP、IF等。

小鼠单克隆抗体是最常用的单克隆抗体之一，在肿瘤诊断治疗、细胞表面抗原检测、机体微量成分测定等领域大量应用。因此制备高特异性、大规模生产的抗体是科研用户的主要需求。w66最给力的老牌生物积累了充足的抗体制备经验和专业技术，可为您提供鼠单抗定制完整的上下游服务。